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        CRISPR-CAS9基因編輯

         發(fā)布時(shí)間:2019/3/5 點(diǎn)擊量:1894

        CRISPR-Cas9 是近年興起的用于靶向基因組特定位置,進(jìn)行DNA修飾的重要工具。研究發(fā)現(xiàn)CRISPR是細(xì)菌為了應(yīng)對(duì)病毒的攻擊而演化而來(lái)的獲得性免疫防御機(jī)制。具體來(lái)說(shuō),在CRISPR和Cas9的作用下,經(jīng)由小RNA分子的引導(dǎo),靶向并沉默入侵者遺傳物質(zhì)核酸的關(guān)鍵部分。在該系統(tǒng)中,crRNA(CRISPR-derived RNA)與tracrRNA(trans-activating RNA)結(jié)合形成的復(fù)合物能特異性識(shí)別靶基因序列,并引導(dǎo)Cas9核酸內(nèi)切酶在靶定位點(diǎn)剪切雙鏈DNA,隨后,細(xì)胞的非同源末端連接修復(fù)機(jī)制(NHEJ)重新連接斷裂處的基因組DNA,并引入插入或缺失突變。另外也可以提供一個(gè)外源雙鏈DNA供體片段(Donor)通過(guò)同源重組(HR)整合進(jìn)斷裂處的基因組,從而達(dá)到對(duì)基因組DNA進(jìn)行修飾的目的。
        目前,CRISPR-Cas9系統(tǒng)的基因組編輯功能已被應(yīng)用于多種生物,包括小鼠、大鼠、斑馬魚(yú)、秀麗隱桿線(xiàn)蟲(chóng),也包含多種細(xì)菌和植物,甚在人體上也有應(yīng)用。


         
        基因編輯與RNA干擾的區(qū)別

        方法

        靶標(biāo)

        質(zhì)粒構(gòu)建

        基因表達(dá)

        基因敲除

        基因定點(diǎn)突變

        基因組改變

        遺傳密碼子改變

        遺傳性

        RNAi

        mRNA

        (轉(zhuǎn)錄水平)

        簡(jiǎn)單

        下調(diào)

        否 

        可借助病毒實(shí)現(xiàn)

        CRISPR-CAS9

        DNA序列(基因組水平)

        簡(jiǎn)單

        敲除

        TALEN

        DNA序列(基因組水平)

        復(fù)雜

        敲除

        基因編輯技術(shù)優(yōu)勢(shì)
        1、操作簡(jiǎn)單,靶向性高。
        2、可實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因特定位點(diǎn)定點(diǎn)敲除。
        3、可同時(shí)對(duì)多個(gè)靶基因進(jìn)行敲除。
        4、可應(yīng)用于任何物種。
        5、CRISPR-Cas9系統(tǒng)是由RNA調(diào)控的對(duì)DNA的修飾,可穩(wěn)定遺傳。
        服務(wù)項(xiàng)目
        普通載體、Cas9/Donor腺病毒顆粒、Cas9慢病毒顆粒
        定制gRNA和HR供體載體
        基因敲除細(xì)胞株
        Gene Knock-Out,Knock-in或Gene標(biāo)記
        客戶(hù)需要提供材料
        1、物種、基因名稱(chēng)或者基因ID;
        2、提供靶細(xì)胞。
        服務(wù)流程
        1、提交項(xiàng)目課題相關(guān)需求和資料。
        2、與我們的專(zhuān)業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)討論項(xiàng)目細(xì)節(jié)。
        3、根據(jù)討論后的意見(jiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行修改。 
        4、雙方均滿(mǎn)意并達(dá)成一致,簽訂技術(shù)服務(wù)合同。
        5、開(kāi)展實(shí)驗(yàn),按期完成合同規(guī)定的內(nèi)容。
        6、結(jié)題,提供實(shí)驗(yàn)原始結(jié)果和分析結(jié)果、實(shí)驗(yàn)流程、實(shí)驗(yàn)條件等等。
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